Полипептид EGF, эпидермальный фактор роста человека, ускоряет рост кровеносных сосудов вокруг поврежденных тканей и стимулирует заживление ран.  Исследования показали, что EGF также способствует регенерации эндотелиальной раны роговицы, зубной пульпы и пораженных тканей почек. Кроме того, EGF является регулятором развития волосяных фолликулов и применяется в средствах для борьбы с облысением. В настоящем обзоре рассмотрены наиболее значимые результаты клинических исследований и потенциальные области применения EGF.

Эпидермальный фактор роста (фактор дифференцировки эритроцитов, EGF, Urogastrone, Homogarol, Supergastrone, Ugaron, sh-Oligopeptide-1, EGF, ЭФР; CAS рекомбинантного EGF из E. coli – 62229-50-9) это полипептид, являющийся ингибирующим фактором желудочной секреции, полученным из мочи человека [1]. EGF представляет собой кислотоустойчивый одноцепочечный пептид с массой 6045 Да, который существует в виде двух изоформ и состоит из 53 аминокислот (Рис. 1) [2]. Пептид обнаруживается в молоке, слюне, моче и плазме, а также в большинстве других жидкостей организма. Данный полипептид ускоряет рост кровеносных сосудов вокруг поврежденных тканей и стимулирует выработку омолаживающих факторов. EGF способствует делению клеток, пролиферации фибробластов, которые синтезируют коллаген и эластин, и росту эпидермальных клеток. EGF индуцирует биосинтез гиалуроновой кислоты посредством взаимодействия с основным фактором роста фибробластов и контролирует выработку большинства действующих на кожу цитокинов [3].

Рисунок 1 – Структура двух изоформ полипептида EGF

Было предпринято много попыток изолировать EGF, но очистка вызывала серьезные затруднения и, вероятно, самый чистый образец EGF удалось выделить в 1955 году [4]. В ранних работах описаны выходы натурального пептида менее 1 мг из 1000 л мочи. Достигнуть успеха исследователи смогли лишь в 1975 году [5], а полный синтез был осуществлен в Японии в 1984 году [6]. В настоящее время получают, в основном, рекомбинантный EGF. 

В сыворотке и в некоторых тканевых экстрактах EGF обнаруживается в ассоциации с высокомолекулярным комплексом (масса 74 кДа), состоящим из двух молей EGF, связанных с двумя молями белка, связывающего EGF-аргининэстеропептидазу (29,3 кДа, pI 5.4) [2]. Нативный EGF протеолитически образуется из ряда высокомолекулярных предшественников с помощью аргининэфиропептидазы. EGF стимулирует пролиферацию различных эпителиальных и мезенхимальных клеток посредством взаимодействия со специфической клеточной поверхностью. EGF является митогеном широкого спектра, т. е., индуцирует клеточное деление. Рецептор EGF (EGFR) обладает внутренней тирозин-специфической протеинкиназной активностью в цитоплазматическом домене. Известно, что в некоторых случаях наблюдается снижении количества EGFR на поверхности клеток параллельно с увеличением их онкогенности. Изменения гена EGFR были выявлены при плоскоклеточной эпидермоидной карциноме, карциномы молочной железы, аденокарциноме слюны, раке поджелудочной железы, легких, молочной железы и головного мозга [2]. Усиленная экспрессия рецепторов EGF в этих клетках может быть вовлечена в развитие опухолей in vivo. 

За время с момента открытия EGF было проведено множество различных биологических испытаний. Так, лекарственные свойства человеческого EGF (hEGF) по отношению к открытым раны изучали на крысах [7]. Улучшения в заживлении на открытых участках ран не было обнаружено при местном применении EGF в индивидуальном виде. Однако авторы обнаружили, что мазь, содержащая EGF и ингибитор протеазы (мезилат нафамостата или мезилат габексата) или желатин, ускоряет скорость заживления открытых ран. Для получения экспериментальной мази смешивали 1 мг EGF и мезилата нафамостата (0,6, 6, 60 мг), мезилата габексата (60, 200, 600 мг) или желатина (20, 100, 500 мг) с 4 мл жидкого парафина и основой до 20 г. Волосы со спины крыс удаляли, и симметрично наносили две открытые раны диаметром по 10 мм. Мази применяли по 0,2 г на каждый участок ежедневно. Значительное увеличение сухой массы грануляционной ткани в месте раны наблюлось при обработке мазью с EGF, содержащей нафамостат, по сравнению с контрольной группой. Влияние ингибитора протеазы на заживление ран линейно зависело от его дозы. Совместное введение нафамостата (3,0 мг/г) с EGFвызывало трехкратное увеличение сухой массы грануляционной ткани по сравнению с контрольной мазью через 3 дня после ранения. Нафамостат был более эффективен, чем габексат или желатин. Разложение меченного ¹²⁵I-EGF в гомогенате раневой ткани значительно снижалось в присутствии ингибитора протеаз. Эти данные показывают, что стабилизация EGF на участке раны является важным фактором, позволяющим проявить его заживляющие эффекты. Авторы [7] предполагают, что мазь, содержащая EGF и стабилизирующий агент, будет подходящей лекарственной формой для ускорения заживления ран. Данное исследование также указывает на важность стабилизации пептидных препаратов для местного применения. Системные эффекты мази с EGF, содержащей ингибитор протеазы или желатин (см. выше), исследовали на крысах с ожогами или открытыми ранами [8]. Через день после ожога, уровни адреналина в плазме, кортизола и глутамино-оксалуксусной трансаминазы были повышены, но лечение смесью EGF+нафамостат значительно подавляло их рост. Кроме того, не было потери массы тела в модели с открытой раной после обработки мазью EGF+нафамостат, тогда как потеря она наблюдалась у животных, у которых применялись мази EGF без нафамостата. Увеличение адреналина в плазме после образования открытой раны также было подавлено применением мази EGF+нафамостат. Таким образом, местное применение мази с EGF, содержащей ингибитор протеазы, оказывает улучшающее системное действие.

Местное применение EGF ускоряет заживление ран за счет пролиферации миофибробластов и синтеза коллагена, что было подтверждено на крысах [9]. При местном нанесении rhEGF (10 µг/г мази) два раза в день в течение 14 дней, с 5-го по 12-й день значительно улучшалось закрытие раны по сравнению с контрольной группой (мазь без rhEGF). Гистологическое исследование на 7-й день после операции показало, что обработка rhEGF увеличивала количество пролиферирующих иммунореактивных клеток в эпидермисе. В целом, местное лечение мазью rhEGF способствует заживлению ран путем увеличения скорости эпидермальной пролиферации и ускорения сокращения раны, связанного с пролиферацией миофибробластов и отложением коллагена.

Влияние hEGF на заживление эндотелиальной раны роговицы человека исследовано в работе [10]. Парные донорские роговицы человека (возраст 73±12 лет) использовали для оценки влияния hEGF на скорость закрытия эндотелиальной раны (WCR), морфометрические параметры (размер клеток, форма и плотность) и на деление клеток в области раны. Эндотелий роговицы был механически поврежден (площадь 4,9 мм²), и для каждой пары одну роговицу обрабатывали 10 нг/мл hEGF, в то время как вторая служила в качестве контроля. WCR оценивали ежедневно по окрашиванию роговицы. Митотическую активность оценивали с помощью авторадиографии ³H-тимидина. Добавление hEGF значительно увеличивало WCR по сравнению с контрольной группой. В закрытой ране (от 4 до 9 дней) средний размер клеток, в среднем, составлял 1940 мкм² в контрольной группе и 1287 нм² в группе, обработанной hEGF. Через пятнадцать дней после ранения средний размер клеток составлял 1910 нм² и 1427 нм² в контрольной и обработанной hEGF группах, соответственно. Все роговицы, подвергшиеся воздействию hEGF, имели более высокую плотность эндотелиальных клеток, чем контрольные. На ранних стадиях закрытия раны клетки в переходной зоне роговиц, обработанных hEGF, имели несколько более вытянутую форму. Однако hEGF не влиял на окончательную форму клеток в закрытой ране. Результаты авторадиографии показали, что hEGF ускоряет синтез ДНК, хотя и в ограниченной степени. Таким образом, в роговице человека hEGF способствует заживлению эндотелиальной раны.

Лекарственные формы EGF влияют на прочность заживающей раны у мышей [11]. Действие локально вводимых лекарственных форм EGF было исследовано на заживление раны кожи у мышей. Были приготовлены две лекарственные формы EGF – раствор с NaCl и биоадгезивный гель с 0,2% полимера Carbopol 940. Две лекарственные формы, содержащие 100 нг/мл EGF наносили на резанные раны кожи из расчета по 5 мкл два раза в день в течение 7 и 15 дней. Прочность на разрыв заживающей раны проверяли на 7-й и 15-й день лечения и сравнивали с контрольной группой. Результаты показывают, что прочность на разрыв раны у мышей была значительно выше на 15-й день лечения в группе, получавшей гель EGF, по сравнению с мышами, получавшими раствор EGF, и контрольной группой.

EGF в концентрации 5 нг/мл непосредственно стимулирует дифференцировку кератиноцитов человека и экспрессию кератинов 6 и 16, участвующих в их дифференцировке и необходимых для реорганизации кератиновых нитей, что было показано на эквивалентах кожи человека ex vivo [12]. В культуры нормальных эпидермальных кератиноцитов человека, полученные из кожи здоровых пациентов, через 5 дней культивации добавляли мышиный EGF. Еще через 2 дня культуры поднимали до границы раздела воздух-жидкость в той же самой культуральной среде. Культуры с введенным EGF имели общие черты, наблюдаемые при регенерации раненного эпидермиса: утолщение всего эпидермиса, усиление скорости пролиферации и миграции, а также увеличение уровней кератинов 6 и 16, кожной антилейкопротеиназы, инволюкрина и экспрессии трансглутаминазы 1. Продление периода культивирования более двух недель привело к быстрому старению контрольных культур. Напротив, культуры с добавлением фактора роста имели тканевую архитектуру, аналогичную здоровому нативному эпидермису и оставшуюся неизменной в течение 4 недель воздействия воздуха. В присутствии 5 нг/мл EGF, клетки быстро образуют ткань, состоящую из 14–16 слоев живых клеток с относительно тонким Stratum corneum после недели воздействия воздуха. Однако, когда период культивирования на воздухе увеличивался до 4 недель, количество слоев живых клеток быстро уменьшается, достигая толщины около 5–7 слоев клеток. Эквиваленты кожи, выращенные в отсутствие факторов роста, образуют ткань с очень небольшим количеством слоев живых клеток (2–4) и плохо определенной архитектурой. Результаты показывают, что регуляция роста, миграции и дифференцировки кератиноцитов зависит от наличия факторов роста [12]. EGF может играть доминирующую роль в раннем заживлении ран.

Совместное введение EGF и пептида-6 (GHRP6), высвобождающего гормон роста, улучшает выздоровление при экспериментальном аутоиммунном энцефалите (ЭАЭ, модель рассеянного склероза) [13]. Легкие и тяжелые формы ЭАЭ были получены на крысах и мышах. EGF и GHRP6 отдельно или в сочетании (200 μ/кг EGF и 660 μг/кг GHRP6 в 200 µл солевого раствора) вводили в терапевтическом и профилактическом режимах. Все животные получали ежедневные внутрибрюшинные инъекции с 10 по 20 день. Клиническая оценка была проведена путем определения концентрации малонового диальдегида (MDA) в сыворотке и относительного уровня инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1) в ткани мозга. Было обнаружено, что только комбинированная терапия EGF+GHRP6 снижала клинический балл при легких и тяжелых формах ЭАЭ. Комбинация также улучшила выживаемость почти у 100% тяжелых животных с ЭАЭ. Также наблюдалось увеличение содержания IGF-1 в мозге и снижение MDA в сыворотке. Комбинация EGF+GHRP6 оказалась эффективной в улучшении естественного течения ЭАЭ и уменьшала воспалительную инфильтрацию и повреждение микрососудов.

Терапевтический эффект комбинированного применения гормона роста, высвобождающего GHRP6 и EGF при аксонопатии (модели бокового амиотрофического склероза, БАС) изучен в работе [14]. Проксимальную аксонопатию индуцировали у мышей 1,2-диацетилбензолом (DAB). После последней инъекции DAB (45-ый день), животные ежедневно получали внутрибрюшинные инъекции EGF (200 µг/кг), GHRP-6 (660 μг/кг), EGF+GHRP6 (соответствующие индивидуальным дозам) или физиологический раствор до 65-го дня. Оценки проводились с помощью поведенческих тестов и путем регистрации комплексного потенциала мышечного действия (CMAP) в трех различных сегментах задних конечностей. Ежедневное внутрибрюшинное введение DAB приводило к значительному снижению массы тела, мышечной силы, разгибательного рефлекса, спонтанной активности и изменения параметров походки. Параллельно, DAB вызывал значительное удлинение латентности начала и уменьшение амплитуды CMAP. Ежедневное введение отдельных соединений не ускоряло восстановление пораженных параметров, за исключением характера походки. Комбинированное лечение GHRP6+EGF привело к значительному улучшению (в ~2 раза) поведенческих параметров, а также электрофизиологического восстановления. Авторы предполагают, что комбинированная терапия с EGF и GHRP-6 может стать хорошей терапевтической стратегией для лечения БАС.

Местное применение EGF улучшает текстуру кожи и внешний вид кожи человека, имеющей видимые признаки фотоповреждений, что было продемонстрировано в исследовании 2012 года с использованием сыворотки, содержащей биоинженерный EGF [15]. В эксперимент были включены 29 женщин в возрасте 39–75 лет с мелкими морщинами, фотоповреждениями и пигментацией. Субъектам наносили сыворотку два раза в день в течение 3 месяцев, в дополнение к солнцезащитному крему и очищающему средству для лица. Клинические оценки показали значимое улучшение тонких линий и морщин, текстуры кожи, размера пор и различных дисхроматических состояний, и тенденцию постоянного улучшения в течение всего периода исследования. Через 3 месяца морщины уменьшились на 12–15%, пигментация и дисхромия – на ~15%, гладкость кожи повысилась на 13% [15].

EGF и GHRP6 изучали в комбинированном подходе при экспериментальном инсульте [16]. У мышей вызывали глобальную ишемию головного мозга и после реперфузии внутрибрюшинно вводили EGF, GHRP6 или EGF+GHRP6. Через три дня после реперфузии совместное введение EGF+GHRP6 (200 μг/кг + 660 μг/кг) уменьшало клинические проявления и объем инфаркта, и сохраняло плотность нейронов. 

Эффективность крема с EGF и сульфадиазином серебра в ускорении заживления ожоговой раны была изучена в клиническом исследовании Фазы III (NCT01553708) в 2013 году на 17 пациентах. Ожоговые раны обрабатывали кремом для местного применения, содержащим 1% сульфадиазина серебра и 6% EGF. Полная эпителизация была достигнута за 23 дня против 30 дней в группе, которой наносили крем без EGF.

Местное использование крема на основе рекомбинантного EGF (Easydew CR®, 0,005% rhEGF) для профилактики лучевого дерматита у 40 пациентов с раком молочной железы изучено в работе [17]. Пациентам, получающим радиотерапию (курс РТ на грудь с минимальной дозой 45 Гр, по 2 Гр пять раз в неделю). Степень радиационного дерматита и боли оценивали с недельными интервалами в течение РТ и через 6 недель после завершения. В группе вмешательства, получавшей EGF, лучевой дерматит максимальной степени 3, 2 и 1 развился у 3 (15%), 11 (55%) и 6 пациентов (30%), соответственно. В контрольной группе лучевой дерматит степени 3, 2 и 1 развился у 8 (40%), 10 (50%) и 2 пациентов (10%), соответственно. В группе вмешательства был более низкий уровень лучевого дерматита 3 степени, чем в контрольной группе. Исследование показало, что крем на основе EGF может сыграть полезную роль в профилактике или минимизации радиационного дерматита у пациентов с раком молочной железы.

Роль EGF и GHRP6 в ускорении восстановления почечной ткани после передозировки канамицина показана на крысах в работе [18]. Повреждение клубочков, проксимальных канальцев и интерстиция при остром поражении почек было меньше в группах, получавших цитопротекторное лечение, чем в группе канамицина. В фазе восстановления цитопротекторное лечение ускоряло регенерацию канальцев.

EGF усиливает остеогенную дифференцировку стволовых клеток зубной пульпы in vitro [19]. Обработка EGF привела к морфологическим изменениям, после которых клетки оказались способны вызывать отложение кальция по сравнению с контрольными. Это говорит о перспективности применения EGF для инженерии костной ткани в периодонтологии и оральной имплантологии.

Эффективность rhEGF (крем Regen-D 150) при лечении язв диабетической стопы показана в исследовании [20]. 50 субъектов были отобраны и разделены на 2 группы в зависимости от применяемого лечения. Группа 1 получала препарат на основе геля hEGH, и группа 2 – плацебо. Пациентов наблюдали в течение 30 дней, а пункционную биопсию проводили в 0 и 14 дни. Полное заживление язв по истечению 30 дней наблюдалось у 21 (78%) субъектов в группе 1, и только у 12 (52%) субъектов из группы 2. Время заживления раны у субъектов 1 группы было значительно меньше, чем у субъектов 2 группы (45±12 против 72±18 дней, соответственно). Раннее и регулярное применение hEGH ведет к профилактике ампутации ног и может быть основной терапией для лечения хронических ран. Рекомбинантный hEGF, под торговой маркой Heberprot-P, используется для лечения диабетических язв на стопах [21]. 

Южнокорейская компания Regeron, Inc. в 2011 году запустила линейку косметических ингредиентов на основе rhEGF, получаемого из E. Coli [22]. Так, Clairesome-ED предназначен для укрепления и повышения эластичности кожи, улучшения цвета лица, барьерной функции кожи, подавления воспалительной реакции и уменьшения шрамов. Для эффективной доставки rhEGF инкапсулирован в Clairesome, композитный двухслойный носитель на основе липид-сурфактанта, который стабилизирует фактор роста. RhEGF включен в состав Repilosome-EPH1, наряду с гормоном роста человека sh-Polypeptide-7 и вазоактивным кишечным пептидом sh-Polypeptide-71. Данной ингредиент нацелен подавление выпадения волос, содействие их отрастанию и заживлению ран. Последнее обусловлено тем, что EGF функционирует как биологический переключатель, который включается и выключается в волосяных фолликулах в начале и в конце фазы анагена волосяного цикла и регулирует целостность фолликула [23]. Цикл роста волос состоит из трех этапов, известных как анаген (рост), катаген (инволюция) и телоген (отдых). Этот цикл регулируется факторами роста. Хотя нормальная экспрессия как EGF, так и его рецептора (EGFR) во внешней оболочке корня подавляется с завершением роста фолликула, непрерывная экспрессия EGF в волосяных фолликулах трансгенных мышей задерживает развитие на финальной стадии морфогенеза. Авторы работы [23] показали, что EGF передает сигналы в клетках кожи через гетеродимеры EGFR/ErbB2 [23]. Местное применение специфических ингибиторов EGFR и ErbB2 полностью ингибировало рост новых волос у мышей дикого типа, но не у трансгенных. Эти данные предполагают, что передача сигналов EGFR необходима для инициации роста волос. С другой стороны, непрерывная экспрессия EGF предотвращает вход в фазу катагена. Предлагается, что EGF функционирует в качестве биологического переключателя, обеспечивая защиту входа и выхода из фазы анагена. Результаты применения человеком крема, содержащего EGF, показаны на рисунке 2.

Рисунок 2 – Клинический тест (пол мужской, возраст 40 лет) [22]

Приведенные данные свидетельствуют об эффективности EGF для стимуляции заживления ран, улучшения состояния кожи и роста волос. Безопасность полипептила изучена мало, однако в исследованиях не приводятся упоминания о каких-либо серьезных побочных эффектах его применения. Таким образом, EGF является привлекательным полипептидом с точки зрения использования в косметических средствах и при лечении ран различной этиологии. Эпидермальный фактор роста усиливает остеогенную дифференцировку стволовых клеток зубной пульпы и способен усиливать минерализацию внеклеточного матрикса, что может быт полезным в периодонтологии и оральной имплантологии. В 1986 году Стэнли Коэн (Stanley Cohen) получил Нобелевскую премию в области физиологии и медицины за работу, разъясняющую роль EGF в регуляции роста и развития клеток [24]. Коэн и его сотрудники продемонстрировали, что EGF непосредственно стимулирует пролиферацию эпидермальных клеток, и что его стимулирующее действие не зависит от других системных или гормональных воздействий. Исследования факторов роста клеток оказались фундаментальными для понимания развития рака и разработки противораковых лекарств. Очевидно, что к настоящему времени исследованы далеко не все области, в которых в будущем EGF мог бы найти применение.

1.         Elks, J., Ganellin, C.R., Dictionary of Drugs: Chemical Data, Structures and Bibliographies, ed. J. Elks, Ganellin, C.R. 1990, Boston, MA: Springer US. p. 474.

2.         To Market, To Market-1985, in Annual Reports in Medicinal Chemistry, B.D. M., Editor. 1986, Elsevier. p. 333.

3.         Atlas of Mesotherapy in Skin Rejuvenation. 2007, London: Informa Healthcare. p. 130.

4.         Gregory, R.A., A new method for the preparation of urogastrone. J Physiol, 1955. 129(3): p. 528-546. DOI: 10.1113/jphysiol.1955.sp005375.

5.         Gregory, H., Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor. Nature, 1975. 257(5524): p. 325-327. DOI: 10.1038/257325a0.

6.         Hagiwara, D., Neya, M., Miyazaki, Y., Hemmi, K., Hashimoto, M., Total synthesis of urogastrone (human epidernal growth factor, h-EGF). Journal of the Chemical Society, Chemical Communications, 1984(24): p. 1676-1678. DOI: 10.1039/C39840001676.

7.         Okumura, K., Kiyohara, Y., Komada, F., Iwakawa, S., Hirai, M., Fuwa, T., Improvement in Wound Healing by Epidermal Growth Factor (EGF) Ointment. I. Effect of Nafamostat, Gabexate, or Gelatin on Stabilization and Efficacy of EGF. Pharmaceutical Research, 1990. 7(12): p. 1289-1293. DOI: 10.1023/A:1015946123697.

8.         Kiyohara, Y., Komada, F., Iwakawa, S., Fuwa, T., Okumura, K., Systemic effects of epidermal growth factor (EGF) ointment containing protease inhibitor or gelatin in rats with burns or open wounds. Biological & pharmaceutical bulletin, 1993. 16(1): p. 73-76. DOI: 10.1248/bpb.16.73.

9.         Kwon, Y.-B., Kim, H.-W., Roh, D.-H., Yoon, S.-Y., Baek, R.-M., Kim, J.-Y., Kweon, H., Lee, K.-G., Park, Y.-H., Lee, J.-H., Topical application of epidermal growth factor accelerates wound healing by myofibroblast proliferation and collagen synthesis in rat. The Korean Society of Veterinary Science, 2006. 7(2): p. 105-109.

10.       Hoppenreijs, V.P., Pels, E., Vrensen, G.F., Oosting, J., Treffers, W.F., Effects of human epidermal growth factor on endothelial wound healing of human corneas. Investigative ophthalmology & visual science, 1992. 33(6): p. 1946-1957.

11.       Çelebi, N., Erden, N., Gönül, B., Koz, M., Effects of epidermal growth factor dosage forms on dermal wound strength in mice. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 1994. 46(5): p. 386-387. DOI: 10.1111/j.2042-7158.1994.tb03820.x.

12.       Gibbs, S., Silva Pinto, A.N., Murli, S., Huber, M., Hohl, D., Ponec, M., Epidermal growth factor and keratinocyte growth factor differentially regulate epidermal migration, growth, and differentiation. Wound Repair and Regeneration, 2000. 8(3): p. 192-203. DOI: 10.1046/j.1524-475x.2000.00192.x.

13.       Del Barco, D.G., Montero, E., Coro-Antich, R.M., Brown, E., Suarez-Alba, J., Lopez, L., Subirós, N., Berlanga, J., Coadministration of epidermal growth factor and growth hormone releasing peptide-6 improves clinical recovery in experimental autoimmune encephalitis. Restorative Neurology and Neuroscience, 2011. 29(4): p. 243-252. DOI: 10.3233/RNN-2011-0595.

14.       García Del Barco, D., Pérez-Saad, H., Rodríguez, V., Marín, J., Falcón, V., Martín, J., Cibrian, D., Berlanga, J., Therapeutic effect of the combined use of growth hormone releasing peptide-6 and epidermal growth factor in an axonopathy model. Neurotoxicity Research, 2011. 19(1): p. 195-209. DOI: 10.1007/s12640-010-9160-8.

15.       Schouest, J.M., Luu, T.K., Moy, R.L., Improved texture and appearance of human facial skin after daily topical application of barley produced, synthetic, human-like epidermal growth factor (EGF) serum. J Drugs Dermatol, 2012. 11(5): p. 613-620.

16.       García Del Barco-Herrera, D., Martínez, N.S.M., Coro-Antich, R.M., MacHado, J.M., Alba, J.S., Salgueiro, S.R., Acosta, J.B., Epidermal growth factor and growth hormone-releasing peptide-6: Combined therapeutic approach in experimental stroke. Restorative Neurology and Neuroscience, 2013. 31(2): p. 213-223. DOI: 10.3233/RNN-120262.

17.       Kong, M., Hong, S.E., Topical use of recombinant human epidermal growth factor (EGF)-based cream to prevent radiation dermatitis in breast cancer patients: a single-blind randomized preliminary study. Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP, 2013. 14(8): p. 4859-4864. DOI: 10.7314/apjcp.2013.14.8.4859.

18.       Salgueiro, S.R., Núñez, L.G., del Barco Herrera, D.G., Febles, E.S., Ares, D.M., López, R.M., Acosta, J.B., Role of epidermal growth factor and growth hormonereleasing peptide-6 in acceleration of renal tissue repair after kanamycin overdosing in rats. Iranian Journal of Kidney Diseases, 2014. 8(5): p. 382-388.

19.       Del Angel-Mosqueda, C., Gutiérrez-Puente, Y., López-Lozano, A.P., Romero-Zavaleta, R.E., Mendiola-Jiménez, A., Medina-De la Garza, C.E., Márquez-M, M., De la Garza-Ramos, M.A., Epidermal growth factor enhances osteogenic differentiation of dental pulp stem cells in vitro. Head & Face Medicine, 2015. 11(1): p. 29. DOI: 10.1186/s13005-015-0086-5.

20.       Viswanathan, V., Juttada, U., Babu, M., Efficacy of Recombinant Human Epidermal Growth Factor (Regen-D 150) in Healing Diabetic Foot Ulcers: A Hospital-Based Randomized Controlled Trial. The International Journal of Lower Extremity Wounds, 2019. 19(2): p. 158-164. DOI: 10.1177/1534734619892791.

21.       Berlanga, J., Fernández, J.I., López, E., López, P.A., del Río, A., Valenzuela, C., Baldomero, J., Muzio, V., Raíces, M., Silva, R., Acevedo, B.E., Herrera, L., Heberprot-P: a novel product for treating advanced diabetic foot ulcer. MEDICC review, 2013. 15(1): p. 11-15. DOI: 10.1590/s1555-79602013000100004.

22.       Oh, D., Reverse-Aging Biotechnology. 2018, Regeron, Inc: South Korea.

23.       Mak, K.K.L., Chan, S.Y., Epidermal Growth Factor as a Biologic Switch in Hair Growth Cycle. Journal of Biological Chemistry, 2003. 278(28): p. 26120-26126. DOI: 10.1074/jbc.M212082200.

24.       Cohen, S., Nobel Lecture 1986. Epidermal Growth Factor, in Physiology or Medicine 1981-1990: Nobel Lectures, Including Presentation Speeches and Laureates’ Biographies, T. Frangsmyr, Lindsten, J., Editors. 1993, World Scientific Pub Co Inc p. 333-345.